Niezmienne naturalne komórki T zabójcy w astmie oskrzelowej

Analiza przepływu komórek NK z ograniczoną ilością CD1d z płynu Bronchoaveolar-Lavage i krwi z bramkowaniem limfocytów i bez. W Panelu A, 6B11 wybarwia znaczną część nietraktowanych komórek CD4 uzyskanych przez płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe, ale tylko niewielką część limfocytów CD4. Wykres rozrzutu i procent wszystkich komórek w bramce limfocytów są pokazane dla reprezentatywnego pacjenta z astmą. Pokazano wykresy przepływu bez ingerencji (wskazane strzałką w prawo) i wykresy przepływu bramkowanego przez limfocyty (wskazane strzałką w dół), a procent komórek nie barwionych, które wybarwiają 6B11 i CD4, jest wskazany przez populację w pudełku. Większość komórek, które kosztują 6B11 i CD4 w niepoddanej terapii populacji, stwierdzono w populacji o wysokiej rozpiętości bocznej, wskazanej przez odwzorowanie na komórki 6B11 + CD4 + i wykazującą ich charakterystykę rozproszenia do przodu (FSC) i charakterystykę rozproszenia bocznego (SSC ). W przypadku populacji bramkowanej limfocytami istnieje bardzo niewiele komórek 6B11 + CD4 +. Liczby w rogach paneli wskazują procent komórek znalezionych w każdym kwadrancie. W panelu B, wykres reprezentacji dla komórek bramkowanych samym CD3 pokazano dla reprezentatywnego pacjenta z astmą. Po bramkowaniu razem z CD3 i dużymi komórkami prawie wszystkie komórki wybarwiają kontrolę izotypową IgG2a, wykazując wysoki poziom barwienia tła w tej populacji komórek. W panelu C poziom wybarwiania 6B11 jest niski zarówno w populacji limfocytów CD4 bramkowanych przez limfocyty, jak i bez limfocytów we krwi. Wykres punktowy dla krwi obwodowej przedstawiono u reprezentatywnego pacjenta z astmą. Niekostkowane i kontrolowane przez limfocyty wykresy przepływu wykazują barwienie 6B11 i CD4. W przeciwieństwie do wyników z płukaniem oskrzelowo-pęcherzykowym, poziom zabarwienia 6B11 jest niski zarówno w nieszczepionych, jak i limfocytarnych populacjach we krwi obwodowej, co może być związane z brakiem makrofagów pęcherzyków we krwi obwodowej. W panelu D klony naturalnych komórek T (NKT) kosztują 6B11 i V.24. Klony te hodowano w interleukinie-2 i napromieniowane komórki jednojądrzaste krwi obwodowej.2 Wykres rozproszenia pokazano dla reprezentatywnego klonu komórki T zabójcy naturalnego. Gated populacja zawiera limfocyty i wyklucza napromieniowane karmniki. Limfocytarna populacja wykazuje brak barwienia dla kontroli izotypowej (IgG2a vs. IgG1) i barwienie kanonicznego przegrupowania alfa-łańcucha receptora limfocytów T zabójcy (V.24 vs. 6B11). Limfocyty T z limfocytów CD1d ograniczone do CD1d znajdują się w bramce limfocytowej i costain z 6B11 i V.24, ale nie odpowiednimi kontrolami izotypowymi.
Nie znaleźliśmy istotnie wysokiego odsetka limfocytów T z naturalnymi zabójcami CD1d (> 60 procent komórek CD3 +) w próbkach z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego od pacjentów z astmą alergiczną, jak podali Akbari i in. (Wydanie z 16 marca) .1 U pięciu pacjentów z astmą alergiczną stwierdziliśmy, że tylko 0,4 do 2,1 procent limfocytów w płynie z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego było limfocytami T naturalnymi zabójcami, na podstawie kosztów związanych z przeciwciałami 6B11 i V.24 (zob. Dodatek dodatkowy, dostępny wraz z pełnym tekstem tego listu na stronie www.nejm.org). Sądzimy, że ta rozbieżność może wynikać z faktu, że autorzy nie zastosowali charakterystycznych właściwości rozpraszania do przodu (wielkość) limfocytów i właściwości rozproszenia bocznego (ziarnistość) przed analizą przepływu, w konsekwencji włączając duże komórki ziarniste, które zabarwiały się niespecyficznie (Ryc. 1) Większość komórek barwiących CD4 w nieszczepionych próbkach z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego wybarwia się 6B11, ale tylko niewielka część komórek CD4 + w obrębie bariery limfocytowej z 6B11. Ponadto, ponieważ 6B11 wytworzono przeciwko epitopowi peptydowemu w regionie CDR3 V.24, wybarwienie za pomocą 6B11 pod nieobecność barwienia V.24 może wskazywać na limfocyty T lub epitopy komórek B ograniczone do CD1d.2-4 Nie jest również jasne, jak 6B11 może barwić komórki T naturalnych zabójców dokładnie, jeśli łańcuch V.24 jest regulowany w dół, jak sugerują autorzy. Chociaż zaobserwowaliśmy, że limfocyty T z naturalnymi zabójczymi limfocytami CD1d zostały wzbogacone w próbki z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego, w porównaniu z krwią obwodową, nie obserwowaliśmy dramatycznej liczby limfocytów T naturalnych zabójców w płynie z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego u naszych pacjentów z astmą.
Seddon Y. Thomas, Ph.D.
Massachusetts General Hospital, Boston, MA 02114
Craig M. Lilly, MD
University of Massachusetts Medical Center, Worcester, MA 01655
Andrew D. Luster, MD, Ph.D.
Massachusetts General Hospital, Boston, MA 02114
[email protected] org
4 Referencje1. Akbari O, Faul JL, Hoyte EG, i in. CD4 + niezmienny receptor komórek T + komórki T zabójców naturalnych w astmie oskrzelowej. N Engl J Med 2006; 354: 1117-1129
Full Text Web of Science MedlineGoogle Scholar
2. Thomas SY, Hou R, Boyson JE, i in. Limfocyty NKT ograniczone do CD1d wyrażają profil receptora chemokinowego wskazujący na napadowe komórki zapalne typu Th1. J Immunol 2003; 171: 2571-2580
Web of Science MedlineGoogle Scholar
3. Kukreja A, koszt G, Marker J, i in. Wiele wad immuno-regulacyjnych w cukrzycy typu 1. J Clin Invest 2002; 109: 131-140
Crossref Web of Science MedlineGoogle Scholar
4. Tahir SM, Cheng O, Shaulov A, i in. Utrata produkcji IFN-gamma przez niezmienne komórki T NK w zaawansowanym raku. J Immunol 2001; 167: 4046-4050
Web of Science MedlineGoogle Scholar
Akbari i jego współpracownicy przeanalizowali charakter komórek T CD4 + płucnych u pacjentów z astmą o nasileniu umiarkowanym do ciężkiego. Autorzy dostarczają danych wskazujących, że większość tych komórek (około 60 procent) jest reprezentowana przez populację niezmiennych komórek T naturalnych zabójców. Komórki te, w przeciwieństwie do konwencjonalnych komórek T, eksprymują konserwatywny receptor komórek T (V.24-J.18), który jest zdolny do rozpoznawania glikolipidów.
Donoszono, że częstotliwość niezmiennych komórek T naturalnych zabójców jest znacznie wyższa w płynie z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego u dzieci z ciężką astmą niż w płynie z kontroli.1 Ciekawe jest to, że w dzieciństwie częstotliwość tych komórek jest wciąż stosunkowo niska, szczególnie wśród osób poniżej czwartego roku życia (0,2%) oraz że odsetek niezmiennych komórek NK naturalnych zabójców wzrasta progresywnie u starszych dzieci (1,2%) (dane niepublikowane). Jest możliwe, że wysoka częstotliwość niezmienników naturalnych komórek T zabójców w płucach dzieci mogłaby przewidywać bardziej poważną chorobę w dorosłym życiu, co sugeruje, że wykrycie niezmiennie naturalnych komórek T zabójców w drogach oddechowych może być wskaźnikiem prognozy choroby. Aby potwierdzić tę hipotezę, wymagane są badania kohortowe i długoterminowe.
Nhan Pham-T
[patrz też: piramida zdrowia dla dzieci, mrt test, mleko z orzechów laskowych ]