Stymulujące autoprzeciwciała wobec receptora PDGF w twardzinie układowej ad

Te autoprzeciwciała mogą wyzwalać PDGFR, który indukuje ROS za pośrednictwem Ha-Ras i sygnalizacji ERK1 / 2. Uważa się, że kaskada ta jest ostatecznie odpowiedzialna za aktywację fibroblastów, która stanowi charakterystyczną cechę twardziny. Metody
Pacjenci
Przebadano czterdziestu sześciu kolejnych białych pacjentów ze sklerodermą (8 mężczyzn i 38 kobiet, średni wiek 58 lat [zakres od 35 do 77]). Do badania włączono również 10 biorców allogenicznych przeszczepów szpiku kostnego, którzy otrzymywali przeszczep przeciwko gospodarzowi. choroby i sklerodermiczne zmiany skórne. (Dodatkowe informacje znajdują się w dodatkowym dodatku, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm.org). Pacjentów zaklasyfikowano do podgrup w zależności od tego, czy mieli oni sklerodermię rozsianą lub ograniczoną twardzinę12, a następnie podzielono na osoby z wczesnym stadium lub późna choroba, jak opisano wcześniej.13 W czasie obecnego badania ci pacjenci nie otrzymywali żadnego leczenia immunosupresyjnego przez poprzednie sześć tygodni.
Tabela 1. Tabela 1. Charakterystyka demograficzna pacjentów i kontroli. Grupy kontrolne obejmowały 20 dobranych pod względem wieku, płci i rasy ochotników zdrowych ochotników, 14 pacjentów z układowym toczniem rumieniowatym, 15 pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów, 15 pacjentów z pierwotnym objawem Raynauda i 10 pacjentów z idiopatycznym włóknieniem płuc. Diagnozę w każdej grupie kontrolnej przeprowadzono zgodnie z ustalonymi kryteriami dla każdego warunku.14-17 Charakterystykę demograficzną i kliniczną badanych grup przedstawiono w Tabeli 1.
Badanie zostało zatwierdzone przez instytucjonalną komisję etyczną (Universit. Politecnica delle Marche, Ankona, Włochy). Po uzyskaniu ustnej i pisemnej świadomej zgody, pobrano próbkę krwi od pacjentów i kontroli (po aklimatyzacji w 21 ° C przez 30 minut), a próbkę wirowano w chłodzonej wirówce po utworzeniu skrzepu. Supernatanty zebrano i przechowywano w temperaturze -30 ° C do czasu ich oznaczenia, zwykle w ciągu czterech tygodni.
Test biologiczny dla autoprzeciwciał przeciwko PDGFR
Próbki surowicy od pacjentów ze sklerodermą i od kontroli badano pod kątem obecności autoprzeciwciał aktywujących PDGFR w funkcjonalnym teście biologicznym. W skrócie, fibroblasty zarodkowe myszy eksprymujące podjednostki . PDGFR, podjednostki . lub oba 18 (F., F. i F) eksponowano in vitro na oczyszczone z IgG immunoglobuliny. Jako komórki kontrolne użyto mysich komórek F – / – pochodzących z zarodków PDGFR i pozbawionych PDGFR (jak opisano w dodatkowym dodatku). Komórki wysiano w dwóch powtórzeniach z gęstością 20 000 na studzienkę 1,83 cm2, hodowano przez 24 godziny w 37 ° C w 0,2% surowicy płodowej i inkubowano w obecności ml oczyszczonej immunoglobuliny IgG (200 ug na mililitr) z pacjent lub normalna kontrola przez 15 minut w 37 ° C przed oznaczeniem produkcji ROS.
Fluorymetryczne oznaczanie wewnątrzkomórkowych ROS generowanych przez adherentne fibroblasty przeprowadzono po obciążeniu komórek dioctanem 2 , 7 -dichlorofluoresceiny (DCF) (10 .M, Molecular Probes), jak opisano wcześniej.8 Każda próbka IgG została przetestowana w dwóch powtórzeniach. Wyniki wyrażono jako wskaźnik stymulacji, który odpowiada (S-C) ÷ (P-C), gdzie S jest intensywnością fluorescencji DCF badanej IgG, C jest intensywnością fluorescencji DCF kontroli negatywnej otrzymanej przez hodowanie komórek bez IgG, a P jest intensywnością fluorescencji DCF kontroli dodatniej uzyskanej przez inkubację komórek z PDGF (15 ng na mililitr przez 15 minut)
[patrz też: gabinet psychoterapii szczecin, mleko z orzechów laskowych, stomatolog na nfz lublin ]
[patrz też: operacja na zaćmę cena, mleko z orzechów laskowych, altaziaja ]