Stymulujące autoprzeciwciała wobec receptora PDGF w twardzinie układowej cd

Różnica między płytkami wynosiła mniej niż 3 procent. Próbki rejestrowano jako pozytywne, jeśli wskaźnik stymulacji był większy niż 95. percentyl wśród normalnych kontroli. W niektórych doświadczeniach oznaczanie ROS oceniano w komórkach eksponowanych na kilka inhibitorów: inhibitor kinazy tyrozynowej PDGFR (AG 1296; 2 .M przez dwie godziny), inhibitor kinazy tyrozynowej receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) (AG 1478; 2 .M dla dwóch godzin), chemicznego inhibitora sygnalizacji ERK1 / 2 (PD 98059, 40 .M przez dwie godziny) i inhibitora farnezylotransferazy, który hamuje farnezylowanie Ras (FTI-277; 20 .M przez dwie godziny) (Calbiochem). Analiza statystyczna
Indeks stymulacji wyraża się jako wartość średnią i zakres. Porównania poziomów autoprzeciwciał przeciw PDGFR między grupą z twardziną a grupami kontrolnymi przeprowadzono za pomocą nieparametrycznego testu Kruskala-Wallisa. Pozostałe dane wyrażono jako średnie . SE. Średnie wartości zostały porównane z użyciem sparowanego testu t Studenta. Wszystkie podane wartości P są dwustronne. Dane analizowano przy użyciu oprogramowania SAS (SAS Institute).
Wyniki
Ponieważ PDGF indukuje akumulację ROS, 8,9 postawiliśmy hipotezę, że stymulujące przeciwciała surowicy celujące w PDGFR były obecne u pacjentów ze sklerodermią. Aby przetestować tę hipotezę i wyeliminować zakłócające działanie PDGF lub innych cytokin obecnych w surowicy, oczyszczono całkowitą IgG od pacjentów ze sklerodermą i określono jej aktywność biologiczną. Jako komórki docelowe wykorzystano linię komórkową mysio-zarodkową, niosącą nieaktywne kopie podjednostek . i . PDGFR jako odniesienia, jak również tę samą linię komórek wyrażających rekombinowane i funkcjonalne podjednostki . lub . PDGFR (F., F. i F). Komórki te eksponowano na frakcje IgG izolowane z próbek surowicy pacjentów. Aby określić poziomy ROS, komórki były głodzone i inkubowane z wrażliwym na nadtlenek fluoroforem DCF przed traktowaniem oczyszczoną IgG.
IgG od pacjentów ze sklerodermą stymulowało wytwarzanie ROS w komórkach F., F. i F w sposób zależny od dawki. ROS gwałtownie wzrosły do maksymalnego poziomu 15 minut po ekspozycji na IgG i powróciły do linii podstawowej 40 do 120 minut później. Najlepszą dyskryminację w aktywności stymulacji ROS pomiędzy prawidłowymi IgG i IgG od pacjentów z twardziną układową uzyskano w komórkach F. i IgG w stężeniu 200 .g na mililitr. Te warunki były przestrzegane we wszystkich kolejnych eksperymentach, o ile nie podano inaczej.
IgG od pacjentów ze sklerodermią
Indukcja ROS i reakcja z receptorem PDGF
Figura 1. Figura 1. Przeciwciała przeciwko PDGFR u pacjentów ze sklerodermią. Panel A pokazuje poziomy ROS (wskazane jako wskaźnik stymulacji, wskaźnik stymulacji jest szczegółowo zdefiniowany w sekcji Metody) w komórkach F. i F – / – inkubowanych z normalną IgG (N) i IgG od 46 pacjentów z twardziną układową (SSc ), 15 z pierwotnym objawem Raynauda (PRP), 14 z układowym toczniem rumieniowatym (SLE), 15 z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RA) i 10 z śródmiąższową chorobą płuc (ILD) (200 ug na mililitr przez 15 minut). Komórki F. również wstępnie inkubowano z selektywnym inhibitorem kinazy tyrozynowej PDGFR (AG 1296; 2 .M przez dwie godziny)
[hasła pokrewne: dyżury aptek olecko, lek po terminie ważności, lek bez recepty na zapalenie ucha ]
[przypisy: https przegladarka skierowan, ile kosztują badania wysokościowe, nfz skierowania do sanatorium zwroty ]