Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków

Migotanie przedsionków jest najczęstszym typem zaburzeń rytmu serca i najczęstszą przyczyną powikłań sercowo-naczyniowych, zwłaszcza udaru. Koneksyna 40 o strukturze szczeliny międzykomórkowej jest ekspresjonowana selektywnie w miocytach przedsionkowych i pośredniczy w skoordynowanej aktywacji elektrycznej przedsionków. Postawiliśmy hipotezę, że idiopatyczne migotanie przedsionków ma podłoże genetyczne i że specyficzne tkankowo mutacje w GJA5, genie kodującym koneksynę 40, mogą predysponować przedsionki do fibrylacji. Metody
Sekwencjonowaliśmy GJA5 z genomowego DNA wyizolowanego z wyciętej tkanki serca i limfocytów obwodowych od 15 pacjentów z idiopatycznym migotaniem przedsionków. Zidentyfikowane mutacje GJA5 transfekowano do linii komórkowej z niedoborem złącza, aby ocenić ich funkcjonalny wpływ na transport białka i międzykomórkowe sprzężenie elektryczne. Continue reading „Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków”

Stymulujące autoprzeciwciała wobec receptora PDGF w twardzinie układowej ad 9

Aktualne dane in vitro wskazują, że te przeciwciała rozpoznają i aktywują PDGFR jako główny cel. Dane mogą również sugerować, że zwłóknienie w sklerodermii jest wyzwalane przez nagromadzenie tych aktywujących autoprzeciwciał we krwi. Analizując kaskadę zainicjowaną przez PDGF in vitro, ostatnio zaobserwowaliśmy, że czynniki wzrostu i ROS regulują białka Ras w pozornie nowatorski sposób.8 W prawidłowych komórkach pierwotnych białka Ras są utrzymywane na niskim poziomie przez ciągłą degradację proteasomalną. W tym ustawieniu PDGF przejściowo indukuje ROS poprzez ERK1 / 2 i ostatecznie zapobiega degradacji Ras przez proteasomy.8 Sklerodermalna IgG aktywuje PDGFR, ale replikuje działanie PDGF tylko częściowo. Monitorowaliśmy reakcję komórek twardziny w hodowli w warunkach pozbawionych surowicy. Continue reading „Stymulujące autoprzeciwciała wobec receptora PDGF w twardzinie układowej ad 9”

Stymulujące autoprzeciwciała wobec receptora PDGF w twardzinie układowej ad 8

Długotrwałe utrzymywanie się reaktywnych form tlenu i ERK1 / 2 ostatecznie prowadzi do stymulacji ekspresji genu kolagenu. Aby określić efekty biologiczne wywołane przez twardzinę skóry twardzinowej, zbadaliśmy ekspresję dwóch genów, które charakteryzują fibroblasty twardziny – geny kodujące .-prolinę mięśni gładkich i kolagen typu I – w normalnych ludzkich fibroblastach eksponowanych na twardzinę skóry twardzinowej. A-aktyna mięśni gładkich jest charakterystycznym markerem miofibroblastów, które są komórkami mezenchymalnymi, które pochodzą z fibroblastów i które mają właściwości zarówno komórek mięśni gładkich, jak i fibroblastów. Substancja .-aktyny mięśni gładkich była indukowana przez twardzinę skóry IgG w prawidłowych ludzkich fibroblastach, ale nie przez normalne IgG (P <0,001), zgodnie z testami immunohistochemicznymi i immunoblottingiem (Figura 4A). Kwas rybonukleinowy Messenga kodujący łańcuchy kolagenu .1 i .2 typu I był silnie indukowany przez sklerodermalną IgG, a nie przez normalne IgG, co pokazano za pomocą analizy Northern blot i ilościowej analizy reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (Figura 4B). Continue reading „Stymulujące autoprzeciwciała wobec receptora PDGF w twardzinie układowej ad 8”

Stymulujące autoprzeciwciała wobec receptora PDGF w twardzinie układowej ad 7

Dane te wskazują PDGFR jako główny cel twardziny. W celu dokładniejszego określenia miejsca działania sklerodermalnej IgG, przeprowadziliśmy immunoprecypitację całkowitych białek komórkowych za pomocą IgG od dwóch pacjentów ze sklerodermą, jednego pacjenta z układowym toczniem rumieniowatym i dwóch normalnych kontroli przy tym samym stężeniu białka (200 .g na mililitr). Figura 3C przedstawia immunoblot z komercyjnymi przeciwciałami anty-PDGFR., anty-PDGFR. lub anty-EGFR. Sklerodermalna IgG skutecznie immunoprecypitowała podjednostki . Continue reading „Stymulujące autoprzeciwciała wobec receptora PDGF w twardzinie układowej ad 7”

Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków ad 7

Wykres po prawej stronie pokazuje, że mutanty connexin 40 również hamują aktywność koneksyny 43 (Cx43). Gdy Pro88 . Ser był koeksprymowany z mieszaniną koneksin typu dzikiego przy stosunku cRNA 2: 1: 1, prawie całkowicie zablokował aktywność kanału obu typów dzikich. Koekspresja Ala96 . Ser z koneksynami typu dzikiego spowodowała również znaczne zmniejszenie aktywności dzikiego typu. Continue reading „Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków ad 7”

Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków ad 6

Lokalizacja koneksyny 40 i tworzenie połączeń między szczelinami jest nieodróżnialna od tej w tkance kontrolnej. W przeciwieństwie do tego, tkanka przedsionkowa od Pacjenta 11, która miała substytucję Pro88 . Ser, wykazywała mozaikowy wzór barwienia, z częstymi niejednolitymi obszarami wewnątrzkomórkowo utrzymanej koneksyny 40 i nieprawidłowym tworzeniem połączenia szczelinowego (Panel C). Podobnie, ale w mniejszym stopniu obserwowano wewnątrzkomórkową retencję koneksyny 40 i nieprawidłowe tworzenie połączeń międzyłomu w tkance przedsionkowej od Pacjenta 9, który miał nieliniowe substytuty Gly38 . Asp i Met163 . Continue reading „Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków ad 6”

Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków ad 5

Bezpośrednie sekwencjonowanie 100 alleli z DNA tkanki sercowej i 240 alleli z limfocytowego DNA z kontroli nie wykazało dowodów na podstawienie Pro88 . Ser, Met163 . Val lub Gly38 . Asp, dostarczając dalszego wsparcia potencjalnie patogenetycznej roli tych podstawień. Zidentyfikowano dwie inne warianty sekwencji w DNA limfocytów z kontrolnych: 369C . Continue reading „Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków ad 5”

Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków czesc 4

Wysoki stopień homologii sekwencji różnych gatunków zidentyfikowanych mutacji występuje na poziomie zarówno DNA jak i białka (Panel F). Zachowane w wysokim stopniu obszary transbłonowe są zacienione. Tabela 2. Tabela 2. Klony Connexin 40 od pacjentów z mutacjami somatycznymi. Continue reading „Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków czesc 4”

Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków cd

Klony sekwencjonowano w celu potwierdzenia mutacji i wykluczono wszelkie inne warianty sekwencji. W eksperymentach lokalizacyjnych, dzikiego typu i zmutowanego GJA5 znakowano białkiem zielonej fluorescencji (GFP). GDD znakowany GFP typu dzikiego lub zmutowany cDNA GJA5 transfekowano do komórek nerwiaka niedojrzałego (N2A), linii komórkowej z niedoborem połączeń z przerwami. Koneksyna 40 wyrażana w transfekowanych komórkach N2A była immunolabelowana rozcieńczeniem 1: 100 przeciwciała anty-connexin 40 (Chemicon), a następnie anty-IgG sprzężonym z Texas Red (Jackson ImmunoResearch Laboratories). Komórki oglądano za pomocą mikroskopii konfokalnej. Continue reading „Mutacje somatyczne w genie Connexin 40 (GJA5) w migotaniu przedsionków cd”

Wykorzystanie prezerwatywy i ryzyko zakażenia wirusem brodawczaka ludzkiego narządów płciowych u młodych kobiet cd

Łącznie 70 .l zdenaturowanego produktu PCR dodano do każdej studzienki tacy do typowania Amplicor zawierającej 3 ml wstępnie ogrzanego roztworu do hybrydyzacji i paska zawierającego sondy oligonukleotydowe . globiny i HPV dla 37 typów HPV. Próbki ujemne dla . globiny uznano za niewystarczające do testowania. O ile nie zaznaczono inaczej, wyniki PCR dla samozbierających się wymazów i zebranych przez klinicystę wymazów z szyjki macicy i sromu pochwy zostały połączone w celu przeanalizowania przejęć i czynników ryzyka zakażenia narządów płciowych. Continue reading „Wykorzystanie prezerwatywy i ryzyko zakażenia wirusem brodawczaka ludzkiego narządów płciowych u młodych kobiet cd”